• Оптимизированная процедура для быстрых и надежных результатов

• Полная конверсия цитозина

• Уникальная система защиты ДНК для высокочувствительного анализа

• Оптимизированные протоколы, включая преобразование из FFPE ДНК

• Форматы спин-колонок и 96-луночных планшетов для высокой производительности

    Наборы EpiTect Bisulfite обеспечивают полную конверсию неметилированных цитозинов в урацилы и последующую очистку за 6 часов. Процедура EpiTect 96 Bisulfite занимает менее 7 часов. Высокочувствительный метод использует инновационную защиту от деградации ДНК, которая гарантирует чувствительные результаты даже от 1 нг ДНК и обеспечивает высокие показатели конверсии более 99%. Благодаря своей уникальной технологии DNA Protect, ДНК, преобразованная EpiTect Bisulfite, отлично подходит для амплификации целых бисульфитомов с использованием наборов EpiTect Whole Bisulfitome. Это обеспечивает надежную амплификацию ДНК в случаях, когда количество ДНК, преобразованной бисульфитом, ограничено. Наборы EpiTect Bisulfite включают процедуру спин-колонки или 96-луночного формата и могут обрабатываться с использованием центрифуги или вакуумного коллектора. Кроме того, набор EpiTect Bisulfite может быть полностью автоматизирован на QIAcube Connect .

Быстрые результаты

    Полная процедура центрифугирования или вакуумирования набора EpiTect Bisulfite — от ДНК до чистой ДНК, преобразованной в бисульфит, готовой к анализу — занимает всего 6 часов. Процедура EpiTect 96 Bisulfite занимает менее 7 часов. Традиционные процедуры преобразования бисульфита могут занять более 18 часов и требуют обширного взаимодействия с пользователем. Набор EpiTect Bisulfite Kit содержит все необходимое для успешного преобразования бисульфита и очистки ДНК.

 

Быстрое и простое преобразование бисульфита

 

 

 

Полная конверсия ДНК

    Каждая реакция набора EpiTect Bisulfite Kit преобразует 1 нг – 2 мкг ДНК с одинаковой эффективностью. Новая процедура и оптимизированные буферы позволяют получать высокие выходы преобразованной ДНК. Высокоэффективное преобразование цитозина очевидно из низких значений C T , полученных при амплификации преобразованной ДНК с использованием ПЦР в реальном времени. Анализ ДНК, преобразованной с помощью набора EpiTect Bisulfite, показывает более 99% конверсии неметилированных цитозинов. Такая высокая скорость конверсии обеспечивает повторяемость и надежность последующего анализа.

Бисульфитная конверсия сложных образцов

    Из-за ограниченного количества доступной ДНК определение паттернов метилирования в ДНК из ценных и ограниченных образцов (например, формалин-фиксированная парафиновая [FFPE] или микродиссекция ткани) является особенно сложной задачей. Однако такие типы образцов представляют особый интерес для успешной идентификации ценных биомаркеров, прогнозирующих заболевания. Наборы EpiTect Bisulfite решают эти проблемы с оптимизированными протоколами для этих типов образцов. Все необходимые буферы и реагенты предоставляются, и требуется лишь минимальная обработка.

    Для прямой бисульфитной конверсии ДНК из образцов FFPE, клеток, крови и тканей без предварительного выделения ДНК мы рекомендуем наборы EpiTect Plus FFPE Bisulfite и EpiTect Plus LyseAll Bisulfite.

 

Предотвращение фрагментации ДНК

    Буфер DNA Protect Buffer имеет уникальную формулу, которая предотвращает фрагментацию ДНК (обычно связанную с обработкой ДНК бисульфитом при высоких температурах и низких значениях pH) и обеспечивает эффективную денатурацию ДНК, в результате чего образуется одноцепочечная ДНК, необходимая для полной конверсии цитозина. Предотвращение фрагментации позволяет проводить последующую амплификацию и анализ больших фрагментов ПЦР. DNA Protect Buffer также содержит индикаторный краситель pH, позволяющий подтвердить правильный pH для конверсии цитозина. Эффективная интегрированная очистка ДНК позволяет хранить преобразованную ДНК в течение как минимум 12 месяцев, не влияя на качество ДНК.

    Процедура EpiTect состоит из нескольких простых шагов, основанных на простой системе связывания, промывки и элюирования QIAGEN). После термической денатурации и преобразования ДНК бисульфитом натрия ДНК наносится на спин-колонку или планшет EpiTect, где с помощью оптимизированных буферов и стандартной микроцентрифуги или вакуумного коллектора она промывается для удаления всех следов бисульфита натрия и элюируется. Элюированная ДНК может использоваться во всех последующих приложениях, включая ПЦР-специфическое метилирование, анализ ПЦР в реальном времени, бисульфитное секвенирование, COBRA и пиросеквенирование.

    Доступ к эпигенетической информации имеет первостепенное значение для многих областей биологических и медицинских исследований — в частности, онкологии, а также исследований стволовых клеток и биологии развития. Однако анализ изменений в метилировании ДНК является сложной задачей из-за отсутствия стандартизированных методов для предоставления воспроизводимых данных, особенно из ограниченного материала образцов. Благодаря недавно представленным решениям EpiTect, QIAGEN предоставляет стандартизированные, преаналитические и аналитические решения: от сбора образцов ДНК, стабилизации и очистки до бисульфитной конверсии и анализа метилирования ПЦР в реальном времени или по конечной точке или секвенирования.

    ДНК, преобразованная и очищенная с помощью набора EpiTect Bisulfite, подходит для использования в ряде последующих приложений, включая:

• ПЦР-специфическая метилирование, ПЦР в реальном времени
• КОБРА 
• Секвенирование/Пиросеквенирование/NGS
• Плавление высокого разрешения
• Массивы метилирования